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請查收!您的全自動(dòng)高通量蛋白純化方案已發(fā)布!

點(diǎn)擊次數:204 更新時(shí)間:2024-05-28

在綠色生物制造和合成生物學(xué)等研究領(lǐng)域中,高質(zhì)量的蛋白分離和純化是研究目的蛋白結構和功能的重要步驟。傳統的分離純化方法通量低、耗時(shí)長(cháng)、均一性差,全自動(dòng)高通量蛋白純化系統在生命科學(xué)研究和生物制藥領(lǐng)域已開(kāi)始廣泛運用,從樣本前處理工序,到不同類(lèi)型的蛋白純化流程,可實(shí)現多管線(xiàn)自動(dòng)化平行實(shí)驗,具有穩定的工藝流程,可極大提高實(shí)驗效率,節約時(shí)間和人力成本;同時(shí)還可以進(jìn)行數據交互,實(shí)現樣本溯源和實(shí)驗數據管理。今天小貝給大家整理了幾種常見(jiàn)好用的蛋白純化方案助力您的科學(xué)研究。

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磁珠捕獲特異性標簽蛋白,因其純化步驟精簡(jiǎn)成熟被廣泛應用,圖1是磁珠純化流程示意圖。小貝為您量身定制蛋白純化全流程自動(dòng)化方案:使用Biomek i系列液體工作站,整合核酸/蛋白提取儀,實(shí)現高效高通量自動(dòng)化蛋白純化,極大節省實(shí)驗時(shí)間和科研精力。

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圖2 Biomek i系列液體處理工作站展示圖



Biomek i系列液體工作站配置96通道和靈活8通道加樣器,適配各種商品化試劑盒和用戶(hù)自配試劑,輕松實(shí)現試劑分裝和高通量樣本純化。同時(shí)工作站支持多設備整合,可進(jìn)行后期無(wú)限升級,添加離心機、酶標儀等設備助力全流程自動(dòng)化實(shí)驗。



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圖3 磁珠純化方法截圖及純化結果



高通量磁珠法蛋白純化模塊可以通過(guò)結合核酸/蛋白提取儀實(shí)現極簡(jiǎn)快速蛋白純化,也可以通過(guò)自動(dòng)化液體工作站結合磁力架完成。使用該功能時(shí)僅需要通過(guò)軟件的簡(jiǎn)易命令行即可完成,如圖3所示,工作站機械抓手會(huì )根據純化流程將Binding Buffer、Beads、Washing Buffer等試劑自動(dòng)搬運到特定位置,使用磁套進(jìn)行磁珠轉運,單次可以完成96個(gè)樣本純化,濃度穩定在0.5-0.8mg/ml,96孔板純化時(shí)間約60min,節省槍頭成本,省時(shí)省力。



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圖4 親和層析柱蛋白純化法實(shí)驗流程



RoboColumn是一種小型色譜柱,用于抗體、蛋白質(zhì)、多肽等的全自動(dòng)平行色譜分離,其純化流程如圖4所示。高通量的RoboColumn ALP 與Biomek i系列液體工作站相結合,配置Span8固定針,可實(shí)現多通道自動(dòng)化的平行層析實(shí)驗流程,顯著(zhù)縮短工藝開(kāi)發(fā)時(shí)間;同時(shí)還可以進(jìn)行數據追蹤,實(shí)現樣本溯源,減少重復工作。


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圖5 RoboColumn ALP模塊結構及Span8固定針示意圖

W1:廢液槽;B1:收集板載架;C1:柱載架



Biomek液體工作站可以實(shí)現臺面整合RoboColumn ALP模塊,通過(guò)軟件流程式編輯方法,控制ALP板位自動(dòng)位移,實(shí)現液體收集,輕松完成蛋白純化,圖6展示了軟件控制ALP板位收集液體的方法以及RoboColumn純化結果,實(shí)驗中1.56mg蛋白上樣,經(jīng)0.1M Gly-HCl(pH2.7)洗脫回收得到蛋白含量1.31mg,純化得率達到84%,8通道操作時(shí)間約為80min。


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圖6 調用RoboColumn方法界面及純化結果展示


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圖7 PhyTip法自動(dòng)化純化關(guān)鍵流程



PhyTip為槍頭式分散固相親和色譜柱,采用槍頭式裝置,純化樹(shù)脂被填充于槍頭頂端,由自動(dòng)化液體處理工作站加載PhyTip,可以實(shí)現單通道到96通道靈活樣品數純化,其純化流程如圖7所示,可對微克級到毫克級的蛋白進(jìn)行純化。


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圖8 PhyTip實(shí)物圖、PhyTip純化方法及結果展示圖



Biomek液體工作站與槍頭式純化色譜柱相結合,利用工作站加載PhyTip讓純化流程變得如移液流程一樣簡(jiǎn)單!如圖8所示,加樣器加載PhyTip,分別在平衡液、蛋白樣品、洗雜液和洗脫液中混勻即可完成高通量蛋白純化,單次可處理96個(gè)樣品,收集10mL菌液使用PhyTip(40uL填料),純化后經(jīng)BCA蛋白定量測定蛋白含量穩定在400ug左右,優(yōu)于手工對照實(shí)驗340ug的結果,96孔板操作時(shí)間約為90min。


小 結



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